En esta entrevista, Cerba Research describe cómo sus equipos pudieron detectar la memoria residente células T en tumores sólidos gracias a la inmunofluorescencia multiplex.
¿Podría proporcionar una descripción general de las células T de memoria residentes en tejidos y su función en un entorno clínico?
Células T de memoria residentes en tejidos (TRM) son representativos de un género de células T localizadas en tejidos periféricos que no regresan a la circulación. Como están incrustados en el tejido, representan la respuesta inicial de las células T en infecciones locales y condiciones inflamatorias.
Los TRM se distinguen por la expresión de CD103, CD69 y CD49a. TRM juega un papel central en el desarrollo y la eficacia de vacunas contra el cáncer y se ha relacionado con un mejor pronóstico y supervivencia en varios tipos de cáncer. Sin embargo, las comparaciones de TRM y células T CD8 citotóxicas en el microambiente tumoral son limitadas.
¿Cuál fue el objetivo principal de su estudio?
Nos propusimos desarrollar el HISTOPROFILE®-Panel múltiplex de TRM para fenotipar células T residentes de memoria en tumores sólidos y mostrar el potencial del panel para estudiar subpoblaciones de TRM en resecciones de tejido FFPE de NSCLC. Esto se logró mediante el diseño y la validación del panel.
¿Cuáles fueron sus principales objetivos durante la investigación?
Los objetivos fueron CD3/CD8/CD49a/CD69/CD103; Células T residentes en memoria – CD8+/CD103+; y subtipos de células T residentes de memoria – CD8+/CD49a+CD8+/CD69+CD8+/CD103+/CD69+CD8+/CD103+/CD69+/CD49a+.
Para lograr esto, obtuvimos tres muestras de resecciones de tejido NSCLC del biobanco Cerba Reseach Montpellier. Un patólogo identificó el área del tumor NSCLC en portaobjetos teñidos con hematoxilina y eosina.
¿Qué métodos de aplicación se aplicaron durante la validación del estudio?
Una vez identificados los portaobjetos, se procedió a un protocolo multiplex secuencial con Opal® (Akoya Biosciences) se aplicaron fluoróforos en el BOND RX® (Leica) teñidor de portaobjetos. A continuación, se capturaron imágenes multiespectrales utilizando el VECTRA® Escáner de portaobjetos PolarisTM (Akoya Biosciences), mientras que el análisis completo de la imagen del portaobjetos se realizó con el HALO® (Indica Labs) Módulo Highplex en imágenes de NSCLC sin mezclar.
¿Podría describir el método de detección utilizado a lo largo de la investigación?
Los portaobjetos simplex se tiñeron para cada biomarcador en un protocolo simplex y se compararon con una sección en serie teñida con el Panel multiplex HISTOPROFILE®-TRM. La concordancia de tinción entre los portaobjetos multiplex y simplex se determinó con HALO® sin deconvolución multiespectral. La precisión del protocolo se determinó mediante análisis de repetibilidad intraejecución y análisis de reproducibilidad interejecución (datos no mostrados).
¿Cómo se prueba la eficacia del diseño del panel?
La solidez del panel se demostró en varios tumores sólidos humanos, incluidos adenocarcinomas de próstata, colon, pulmón y riñón, linfoma de Hodgkin, melanomay adenocarcinoma seroso de ovario. Posteriormente, se analizaron imágenes multiespectrales de barrido completo utilizando HALO para determinar la eficacia del método.
¿Puede resumir por qué el panel multiplex es adecuado para detectar células T de memoria residentes en tejidos en tumores sólidos?
El HISTOPROFILE®-TRM Panel consta de marcadores CD8, CD3, CD69, CD103 y CD49a, y se ha desarrollado y utilizado específicamente para la detección de células T residentes en muestras de NSCLC humano.
El panel demuestra poderosamente la nueva capacidad para fenotipar el TRM mediante varias combinaciones de los objetivos incluidos.
Varias subpoblaciones de TRM en áreas tumorales y no tumorales podrían determinarse con análisis de imágenes. La fuerza y robustez del panel multiplex lo convierten en una excelente herramienta para investigar las poblaciones de TRM a través de una variedad de tumores sólidos humanos.
Los portaobjetos simplex se tiñeron para cada biomarcador individual en un protocolo simplex y se compararon con una sección en serie teñida con el IHC multiplex. La concordancia de tinción entre el portaobjetos multiplex y los portaobjetos simplex se determinó mediante análisis con HALO® después de la deconvolución multiespectral. A) Imágenes de ejemplo (arriba) de una diapositiva simplex para el objetivo A (izquierda) y la diapositiva multiplex (derecha) y el HALO correspondiente® máscaras que identifican células positivas (abajo). B) Resultados del análisis de paneles Treg humanos y de ratón. El porcentaje de células positivas del portaobjetos simplex (barra negra) se compara con el portaobjetos multiplex (barra blanca). Se obtuvieron resultados satisfactorios tanto para HISTOPROFILE® -Paneles Treg. Crédito de la imagen: Investigación de Cerba
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Acerca de la investigación de Cerba
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